血小板同種抗体検査法

　抗血小板抗体の測定法としては、患者血小板表面の抗体を検出する方法と、患者血清中の抗血小板抗体を検出する方法に分けられる。患者血小板表面に結合している抗体を platelet- associated　ＩｇＧ（ＰＡＩｇＧ）、血清中に存在する抗血小板抗体を platelet bindable ＩｇＧ（ＰＢＩｇＧ）と呼んでいる。

　○ＰＡＩｇＧ測定法；抗血小板自己抗体のみを検出し、抗血小板同種抗体は検出し
　　　　　　　　　　　ない。
　　　　　　　　（直接抗グロブリン試験に相当する検査法）

　○ＰＢＩｇＧ測定法；抗血小板自己抗体のみならず抗血小板同種抗体も検出する。
　　　　　　　　（間接抗グロブリン試験に相当する検査法）

検体

　凝固血液から分離した血清を用いる。
　（少しでも血漿成分が含まれていると偽陽性となるため、トロンビン処理が必要で
　　ある。）

検査法

① 混合受身凝集法（ＭＰＨＡ）

　マイクロプレートＵ底に血小板を固相し被検血清を感作後、洗浄し抗ヒトＩｇＧ抗体（ＩｇＭ、ＩｇＡ）をラベルした固定ヒツジ血球（指示血球）を加え、室温で反応させて判定する。わが国では標準的検査法として最も広く普及している。
抗ＨＬＡ抗体と抗ＨＰＡ抗体を同時に検出できる。
反応が陽性の場合は抗ＨＬＡ抗体と抗ＨＰＡ抗体の鑑別が必要である。
　＝　抗ＨＬＡ抗体と抗ＨＰＡ抗体の鑑別　＝
　　0.8Ｍクロロキン溶液をプレートに１時間反応させ、ＨＬＡ抗原を不活化して５回
　　洗浄し、検査に用いる。反応が陰性化または減弱した場合はＨＬＡ抗体を疑う。
　※0.8Ｍクロロキン溶液
　　クロロキンジホスフェイト（ＳＩＧＭＡ社）４１ｇにダルベッコＰＢＳ１００ｍｌに
　　溶解し、５Ｎ　ＮａＯＨでｐＨ5.0に合わせる（４℃で数ヶ月保存可能）。

● 抗ＨＬＡ抗体の検出にはリンパ球細胞毒試験（ＬＣＴ；lymphocyte cytotoxicity
　test）、あるいは抗グロブリン異種血清を用いることで感度を２～３倍上昇させた
　ＡＨＧ－ＬＣＴ法が用いられる。

② ＭＡＩＰＡ法

　血小板と被検血清を反応させた後、血小板の各糖蛋白に対するモノクローナル抗体（ＧＰⅠａ/Ⅱａ、ＧＰⅠｂ、ＧＰⅡｂ、ＧＰⅡｂ/Ⅲａ、ＧＰⅣなど）を反応させ抗原糖蛋白をマークする。次に血小板膜を可溶化後、抗マウスＩｇＧ、ＩｇＭ抗体をコートしたプレートに分注し、酵素抗体法で検出する。

③ 蛍光抗体法（ＰＳＩＦＴ－ＦＣＭ）

　血小板をパラホルムアルデヒドで固定した後、固定血小板と被検血清を反応させて、洗浄後蛍光標識抗ヒトＩｇＧ、ＩｇＭ抗体を加え、血小板に結合した蛍光強度を蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリー（ＰＳＩＦＴ/ＦＣＭ）で測定する。

※ 被検血清の代わりにＨＰＡ特異性既知の抗血清を用いることで、被検血小板型タイピングに応用できる。

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